病毒保存液病毒滅活效果檢測

病毒保存液適用于病毒、流感病毒、手足口病毒等常見病毒樣本采集保存運輸工作，是采樣管內浸末采樣拭子病毒樣本一種保護病毒的被檢測物質的液體，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位組織樣本，儲存的樣本可用于后續的核酸提取或純化等臨床實驗。

病毒保存液通常分為兩種，一種是非滅活型，能夠保護病毒的蛋白和核酸，另一種是滅活型，通常含有滅活病毒的裂解鹽，裂解蛋白而保護核酸。

滅活型病毒保存液：主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液，里面添加有高濃度的裂解鹽，能夠迅速高效地使待測樣本利的病毒蛋白裂解失活，可以有效防止感染，同時又含有Rnase酶抑制劑，能保護病毒核酸不被降解，后續的NT-PCR實驗只要能檢測出病毒的核酸即可以做出診斷。而且能在常溫下保存相對較長的時間。

非滅活型保存液：主要是以運送培養基為基礎改良的病毒維持液型保存液。這一種是同時保留了病毒的蛋白質外殼以及病毒核酸DNA或者RNA，這樣病毒在體外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性，當然操作失誤時也有一定的感染性風險。采樣后長時間保存需要保持嚴格低溫。

中科檢測可開展針對流感病毒、腸道病毒、冠狀病毒、皰疹病毒等病毒保存液病毒滅活效果檢測，病毒保存液檢測可針對不同保存溫度、不同保存時間等不同條件下的病毒活性及病毒滅活率。

病毒保存液檢測方法

1. 試驗對象：

毒株:甲型流感病毒HINI (VR- 1469)

細胞: MDCK細胞.

2.試驗步驟：

1）取樣品病毒保存液（非滅活型） 9.8mL，加入0.2mL病毒原液混勻，分裝若干測試液，存至要求溫度;

2）保存至對應天數后取出測試液，檢測病毒滴度；

a）10倍倍比稀釋測試液；

b）將稀釋液加入含生長至單層的MDCK細胞的96孔細胞培養板上，并設置正常對照組，加等量培養液；

c）置于35'C、5%CO2的培養箱中孵育60 min后棄去上清液，加入雙抗400 IU/mL的維持培養液繼續孵育3~5天，每天觀察細胞增長狀況；

d）當接種病毒的MDCK細胞出現變圓或縮小等病變現象時，記錄產生細胞病變的情況;

e）根據Reed-Muench公式計算半數感染量TCID50。

病毒保存液病毒滅活效果檢測